前 言
食品中葡萄糖的测定方法，一般采用《国际食糖分析方法统一委员会》规定的“兰━
挨农法”(Lane and Eynon's Method)和“姆松━华尔格法”(Munson and Walker's Met-
hod)，即菲林氏溶液氧化还原滴定法。此法虽沿用已久，但测定结果只是近似值。因使用
菲林氏溶液滴定葡萄糖(还原糖)时,其他具有还原能力的单糖会干扰测定结果。本标准采
用的酶━比色法和酶━电极法是在检索了近20年107篇国外文献的基础上，经过反复实验、
验证而制定的。酶━比色法和酶━电极法使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有专一性，只能催
化葡萄糖水溶液中的β─D─葡萄糖起反应(被氧化)，因此测定结果是真实值。本标准的
酶━比色法为仲裁法；酶━电极法为快速法。
本标准的附录A、附录B都是标准的附录。
本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。
本标准起草单位：中国农垦北方食品监测中心(酶━比色法)；山东省科学院生物研究
所(酶━电极法)。
本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审校。
本标准主要起草人：张宗城，刘宁，冯德荣，孙士青，宋家华，郝煜。
目 次
前言
1 范围 ………………………………………………………………………………………… x
2 酶━━比色法 ……………………………………………………………………………… x
3 酶━━电极法 ……………………………………………………………………………… x
附录A(标准的附录) ………………………………………………………………………… x
附录B(标准的附录) ………………………………………………………………………… x
中华人民共和国国家标准
食品中葡萄糖的测定方法 GB／T 16285－96
酶－比色法 酶－电极法
Method for determination of glucose in food
Enzyme-Colorimetric method Enzyme-Electrode method
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1 范围
本标准规定了用酶━比色法和酶━电极法测定食品中葡萄糖的方法，适用于各类食品
中葡萄糖的测定；亦适用于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定。
本标准酶━比色法的最低检出限量为0.01μg(葡萄糖)／mL(试液)；酶━电极法的最
低检出限量为1.0mg／100mL。
2 酶━比色法 （略）
3 酶━电极法
3.1 原理
葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化β─D─葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成
D─葡萄糖酸─δ─内酯和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流
值与β─D─葡萄糖的浓度呈线性比例，在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄糖含量。
GOD
C6H12O6 ＋ O2 ─→ C6H10O6 ＋ H2O2
3.2 试剂
3.2.1 组合试剂盒
a 葡萄糖氧化酶酶膜圈:含葡萄糖氧化酶(GOD)15U(活力单位)；须在0～4℃左右保存，
有效期12个月。
b 复合试剂：含磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠、苯甲酸钠、
庆大霉素硫酸盐；常温保存，有效期24个月。
c β─D─葡萄糖标准溶液：浓度100.0mg/100mL；密封保存，有效期12个月。
3.2.2 缓冲溶液
将一袋复合试剂(3.2.1b)溶解在1000mL蒸馏水中，摇匀。pH＝7.2±0.1。
3.3 仪器和设备
实验室常规仪器及下列各项：
3.3.1 研钵或粉碎机。
3.3.2 分析筛。
3.3.3 组织捣碎机。
3.3.4 酶电极葡萄糖分析仪 ：直接读数式 ；测量范围0～100.0mg/100mL (β─D─葡萄
糖)；测量精度±1.0mg／100mL(β─D─葡萄糖)。
3.3.5 微量进样器：容量50μL，精度1μL。
3.4 试样的制备
3.4.1 固体样品
粉末状样品：取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。
颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100
目分析筛，置于密闭的玻璃容器内。
新鲜水果、蔬菜等固体样品：取有代表性的可食部分至少200g，置于密闭的玻璃容器
内。
3.4.2 糊状样品
取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。
3.4.3 固液体样品
取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。
3.4.4 液体样品
取有代表性的样品至少200mL，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。如样品中含有二
氧化碳， 须用三角瓶取200mL，摇至基本无气泡，安装冷凝管，置沸水浴中加热10min，
取出冷却至室温。
3.5 试液的制备
3.5.1 固体试样和固液体试样
一般固体试样和固液体试样：称取试样(3.4) 1～10g(使之定容后葡萄糖含量为1～200
mg/mL) 于100mL烧杯内，精确至0.0001g，用蒸馏水移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇
匀，放置30min(摇动2～3次)。用快速滤纸或脱脂棉过滤。弃去最初滤液，收集1～2mL滤液
于带盖小试管中。
水果、蔬菜试样：称取试样(3.4) 1～10g于100mL烧杯内(使之定容后葡萄糖含量为1～
200mg/mL)，精确至0.0001g。加入煮沸的蒸馏水30～50mL和5mL缓冲溶液(3.2.2)，继续煮
沸3～5min，冷却至室温后用研钵研细或用组织捣碎机捣碎。用蒸馏水移入100mL容量瓶中，
稀释至刻度，摇匀。 用快速滤纸或脱脂棉过滤。弃去最初滤液，收集1～2mL滤液于带盖小
试管中。
食用葡萄糖试样：称取试样(3.4) 1～10g于100mL烧杯内，精确至0.0001g。加入约50mL
蒸馏水，溶解后煮沸2min。冷却后用蒸馏水移入1000mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。
3.5.2 糊状和液体试样
称取试样(3.4) 1～10g(使定容后葡萄糖含量为1～200mg／mL)于100mL烧杯内，精确至
0.0001g。用蒸馏水移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。用快速滤纸或脱脂棉过滤(如
溶液呈透明状，可免除过滤)。弃去最初滤液，收集1～2mL滤液于带盖小试管中。
3.6 分析步骤
3.6.1 校正仪器
从组合试剂盒中取出电极，将其表面清理干净，吸取缓冲溶液(3.2.2)滴在电极表面。
用小镊子取一片酶膜圈，安装在电极表面，使酶膜圈中心和电极中心的白金完全贴紧，形
成无气泡的薄层液体，然后将电极安装在反应池内。
仪器开机后，缓冲溶液即自动进入反应池，并自行冲洗。当仪器出现进样指令后，用
微量进样器准确吸取25μL标准溶液(3.2.1C)，用滤纸擦净针尖外部，将标准溶液注入进样
口内。20～40s后仪器自动显示标准溶液的指示值。再等30～60s，仪器自行完成冲洗过程，
即可重复注入标准溶液(3.2.1C)数次，直至仪器显示允许开始测定样品。当连续两次标准
溶液显示值的相对误差小于2.0％时， 即完成校正步骤。
3.6.2 测定样品
用试液(3.5) 冲洗微量进样器，至少两次。准确吸取25μL试液(3.5)，用滤纸擦干针
尖外部，注入进样口。20～40s后读取显示值。
3.7 分析结果的表述
样品中葡萄糖的含量以质量百分率表示，按式(2)计算:
R×V 3
─────
1000×m 1 R × V 3
X2 ＝ ──────── × 100 ＝ ───── ………………………(2)
100 1000×m 1
式中:X2 ── 样品中葡萄糖的含量，质量百分率，％；
R ── 仪器测定值，mg/100mL；
V3 ── 试液的定容体积，mL;
m1 ── 试样的质量，g。
计算结果精确至小数点后第1位。
3.8 允许差
同一样品的两次测定值之差:
样品中葡萄糖含量小于1.0％时，不得超过两次测定平均值的5.0％；
样品中葡萄糖含量大于或等于1.0％时，不得超过两次测定平均值的2.0％。
附录 A (标准的附录)
葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及判定规则
A1 技术要求
A1.1 酶活力
葡萄糖氧化酶活力(U／mg) ≥ 20；
过氧化物酶活力(U／mg) ≥ 50。
A1.2 干扰酶
葡萄糖氧化酶、过氧化物酶中都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、β ─ 果糖苷
酶、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
A2 试验方法
用移液管吸取0.50mL葡萄糖标准溶液(2.2.6)，置于10mL比色管中，加入100μg可溶性
淀粉(HGB3095，分析纯)、100μg纤维二糖 (生化试剂) 、100μg乳糖(HG 3 ─ 1000，分
析纯)和100μg蔗糖(HG3─1001，分析纯)，再加入3mL酶试剂溶液(2.2.2)。以下按2.6.1步
骤操作。
测定吸光度后，在标准曲线(按2.6.1)上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算葡萄糖的
回收率：
C
F ＝ ─────×100
0.5×200
式中： F ━━ 葡萄糖的回收率，％；
C ━━ 葡萄糖的实测值，μg。
A3 判定规则
测得葡萄糖的回收率，如在 95％ ～ 105％范围内，则判定葡萄糖氧化酶和过氧化物
酶符合要求。
附录 B (标准的附录)
葡萄糖氧化酶酶膜圈性能判定方法
B1 酶膜活性的判定
校正仪器时，注入25μL标准溶液(3.2.1C)，仪器显示标准溶液的指示值后， 按下酶
膜响应键，则显示出酶膜活性相对值。如相对值大于10.0，则表示酶膜活性符合要求;相对
值小于10.0时，应更换新酶膜。
B2 酶膜线性的判定
校正仪器操作步骤完成后，仪器显示酶膜线性检查指令。用微量进样器注入50μL标准
溶液(3.2.1C)，如显示值大于184.0，表示酶膜线性良好；小于184.0时，应按下仪器线性
校正键，进行线性校正，或更换新酶膜。
B3 酶膜抗干扰性的判定
校正仪器操作步骤完成后，用微量进样器吸取25μL新配制的1％亚铁氰化钾溶液，注
入反应池进样口。当仪器显示值为－2.0～＋6.0时，表示酶膜抗干扰符合要求；否则应更
换新酶膜。
1％亚铁氰化钾溶液的配制:用100mL烧杯准确称取1.15g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O，
GB1273，分析纯]，加入少量蒸馏水使之溶解，转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。
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国家技术监督局1996-04-10批准 1996-12-01实施